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叠氮类四唑盐是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶能够被还原成橙黄色水溶性的甲月赞。生成的甲臜能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

此法是用于测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度、高稳定性且无放射性的比色检测法。实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT,XTT,MTS高，线性范围更宽。

百奥莱博四唑盐对细胞无明显毒性。加入百奥莱博四唑盐显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
   
2. 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有百奥莱博四唑盐的待测溶液在450nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入百奥莱博四唑盐，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100μL培养基和10μL百奥莱博四唑盐进行检测。
   
3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。
   
4. 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 96孔板加入细胞100μL/孔(约1×10⁴)，置37 5%CO ℃ 2细胞培养箱培养24小时。
   
2. 加入适当浓度的受试化合物。
   
3. 将96孔板在37℃，含5% CO₂空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
   
4. 向各孔中加入10μL的百奥莱博四唑盐工作液。
   
5. 37℃下孵育1～4小时。
   
6. 酶标仪在450nm波长处检测每孔的光密度。
   
7. 结果分析
   
   1. 细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加百奥莱博四唑盐，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加百奥莱博四唑盐，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。
      细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
      细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
      
   2. 求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。